PCR analýza pro hepatitidu C.

Virová hepatitida C je jednou z nejnebezpečnějších a nejobtížněji diagnostikovatelných nemocí. Problém je v tom, že toto onemocnění je často detekováno až v pozdějších stadiích kvůli skutečnosti, že jeho hlavní forma je chronická a CHC je asymptomatická. Je to však včasná diagnóza, která vám umožní zvolit nejvhodnější léčbu, která vám pomůže navždy zapomenout na virový zánět jater..

Jednou z nejuniverzálnějších metod pro stanovení HCV je polymerázová řetězová reakce (PCR). Co je ale PCR analýza pro hepatitidu C? Jaké jsou vlastnosti tohoto testování? Jak se PCR analýza hepatitidy C kvalitativně liší od kvantitativní? Jak je dešifrován výsledek testu? Odpovědi na každou z těchto otázek najdete v našem článku..

Diagnostika HCV pomocí PCR

Polymerázová řetězová reakce je jednou z nejběžnějších a nejpřesnějších metod diagnostiky HCV. Ale co ukazuje test PCR na hepatitidu C? Výsledky testu umožňují určit přítomnost flavaviru v těle hostitele a také stupeň virové zátěže v těle..

Pro analýzu se použije vzorek venózní krve pacienta odebraný v den studie. Test PCR na hepatitidu C se doporučuje pro následující kategorie lidí:

  • Pacienti s detekovanými imunoglobuliny na antigeny původce HCV
  • Pro ženy během těhotenství
  • Zdravotničtí pracovníci, kteří jsou neustále v kontaktu s infikovanými tělesnými tekutinami
  • Pacienti s anamnézou dříve vyléčené virové hepatitidy
  • Pacienti se zjevnými příznaky poškození jater

Test na hepatitidu C PCR může být kvalitativní nebo kvantitativní. Obě metody se aktivně používají při diagnostice HCV. Zvažme podrobněji vlastnosti kvalitativní a kvantitativní analýzy PCR pro hepatitidu C..

Kvalitativní testování

Kvalitativní odpověď se provádí, pokud dříve stanovená diagnóza HCV vyžaduje potvrzení. Výsledky testu mohou být pozitivní nebo negativní. Pozitivní reakce naznačuje přítomnost infekčního agens v těle subjektu. Negativní výsledek zase naznačuje buď nepřítomnost patogenu, nebo jeho nevýznamnou koncentraci..

Co je PCR pro hepatitidu (kvalitativní test)? Toto testování pomáhá definitivně určit diagnózu. Náklady na jeho implementaci v Moskvě se v závislosti na klinice pohybují od 1800 do 3000 rublů.

Kvantitativní odpověď

Pokud již byla stanovena diagnóza, je darována krev pro kvantitativní polymerázovou řetězovou reakci. Analýza umožňuje určit patogenní zátěž v těle pacienta v tuto chvíli. Ošetřující lékař tedy obdrží informace o tom, která oblast jater je ovlivněna flavavirem, a může zvolit požadovaný terapeutický režim v konkrétním případě..

Čím vyšší jsou parametry patogenu v krvi pacienta, tím závažnější bude fáze léčby. Náklady na kvantitativní polymerázovou řetězovou reakci na moskevských klinikách se pohybují od 1 800 do 4 000 rublů, v závislosti na výběru zdravotnického zařízení.

Příprava na test na hepatitidu C PCR

Odpověď na otázku „Co je to PCR analýza pro hepatitidu C?“ nalezeno. Jak se ale připravit na nadcházející diagnózu? Při přípravě na darování vzorku krve pro PCR test na hepatitidu C by měl pacient:

  • Několik dní před příjezdem do laboratoře úplně upusťte od rychlého občerstvení a jiných těžkých a tučných jídel
  • Do 24 hodin před provedením testu PCR na hepatitidu C nepijte alkohol a nekuřte
  • Nejezte 8 hodin před diagnózou
  • Pro vaši vlastní bezpečnost se před zavedením injekční jehly do žíly ujistěte, že zdravotník používá pouze sterilní jednorázovou injekční stříkačku

Pro polymerázovou řetězovou reakci je odebráno velmi málo krve. Po zákroku tedy pacient nepotřebuje rehabilitaci. Ihned po zákroku tedy pacient odchází domů. Diagnostika se provádí ráno.

Dekódování analýzy PCR

Dekódování PCR testu na hepatitidu C se provádí v lékařské laboratoři. Míra chyby v konečných výsledcích závisí na kompetenci zdravotnických pracovníků a na tom, jak subjekt dodržoval pravidla přípravy na testování..

V případě kvalitativní analýzy PCR pro hepatitidu C je důležité vzít v úvahu prah citlivosti reagencií, který kolísá v rozmezí 10–500 IU / ml. Kvalitní polymerázová řetězová reakce může mít pouze 2 výsledky:

  • Pozitivní. Diagnóza virové hepatitidy C je potvrzena detekcí flavaviru v krvi pacienta. Koncentrace patogenu v krevní plazmě je dostatečná pro stanovení diagnózy. Pokud byla diagnóza provedena po léčbě, takový výsledek naznačuje neúčinnost terapie..
  • Záporný. Patogen chybí nebo je jeho koncentrace v krvi extrémně nízká. Takový výsledek ne vždy naznačuje absenci infekce. Subjektu se doporučuje absolvovat další testy citlivosti na činidla.

Chcete-li zjistit, co ukazuje analýza PCR pro hepatitidu C při kvantitativním testování, musíte začít od středního indikátoru, který se rovná 8x10 ^ 5 IU / ml (800 000 IU / ml).

Pokud je úroveň patogenní zátěže nižší nebo rovna průměru, je pacientovi předepsána léková terapie založená na lécích s přímým antivirovým účinkem. Pokud je toto číslo vyšší než 800 000 jednotek, bude ošetřující lékař muset přemýšlet o závažnějších opatřeních k boji proti HCV. Pacient může potřebovat transplantaci jater.

Stanovení virové hepatitidy C pomocí PCR se provádí v mnoha zdravotnických zařízeních v hlavním městě. Testování lze současně provádět jak v ústavním, tak v ambulantním prostředí..

PCR analýza pro hepatitidu C: kde a jak ji správně předat, což znamená pozitivní a negativní výsledek

PCR pro hepatitidu C je povinnou analýzou při vyšetřování pacienta s příznaky poškození jater. Studie je předepsána k potvrzení diagnózy a získání nejúplnějších informací o původci onemocnění, aktivitě virové infekce. Výsledky slouží jako základ pro předepisování antivirové terapie, stanovení jejího trvání a hodnocení její účinnosti..

Diagnostika využívající techniku ​​polymerázové řetězové reakce se rozšířila relativně nedávno. Výzkum na toto téma se provádí od poloviny 70. let. První publikace o možnosti využití PCR v praktické medicíně se však objevily až v polovině 80. let..

  • Druhy PCR
  • Indikace pro zkoušku
  • Kam vzít?
  • Pravidla dárcovství krve
  • Dekódování výsledků
  • Pros diagnostiky PCR
  • Náklady

Při vysvětlování toho, co je to PCR, lékaři zdůrazňují, že se jedná o nejspolehlivější a nejspolehlivější analýzu hepatitidy C. Tento test umožňuje nejen identifikovat RNA částice viru, ale také určit jeho koncentraci (indikuje aktivitu infekčního procesu) a genotyp. Získané výsledky hrají klíčovou roli při určování taktiky a schématu další terapie..

Jaká je podstata uskutečnění reakce? Pomocí určitých biologicky aktivních látek je dosaženo zvýšení počtu RNA částic viru v malém objemu krve. Následně jsou části genomu stanoveny různými fyzikálně-chemickými metodami.

PCR se provádí pomocí několika komponent:

  • Primer. Jedná se o uměle syntetizovanou sloučeninu, ve které je nukleotidová sekvence zcela identická se specifickou oblastí RNA viru, která nepodléhá mutacím a změnám v závislosti na genotypu. Stanovení RNA viru hepatitidy C se provádí pomocí přísně specifického primeru.
  • RNA polymeráza. Enzym charakterizovaný stabilitou a strukturní stabilitou na pozadí teplotních změn nezbytných pro správný průběh chemické reakce. Poskytuje konstrukci řetězce RNA v jednom z fází PCR.
  • Směs bílkovin. K vytvoření dalších úseků RNA je zapotřebí „stavební materiál“, pro který se do biologického vzorku přidají určité sloučeniny proteinové struktury.
  • Buffer. Směs, která udržuje optimální hladinu pH pro polymerázovou řetězovou reakci.
  • Vzorek biologického materiálu, u kterého je podezření, že obsahuje vzorek RNA HCV (virus hepatitidy C).

V některých metodách stagingové PCR se navíc používají sondy RNA a další interní kontroly, které se používají jako kontrolní vzorky při identifikaci výsledků.

Samotný proces zvyšování oblastí virové RNA pomocí matrice se nazývá amplifikace. Reakce probíhá v několika fázích:

  1. Denaturace. Proces „odvíjení“ řetězců RNA je zajištěn zvýšením teploty na určitou úroveň.
  2. Žíhání. Po snížení teploty na požadované hodnoty se primery připojí k RNA. Tato fáze je možná, pouze pokud jsou ve vzorku krve přítomny požadované virové částice..
  3. Přímá syntéza oblastí virové RNA za účasti enzymů.

Uvedené cykly fázování PCR se opakují několik desítekkrát, což poskytuje mnohonásobný nárůst počtu oblastí RNA původce hepatitidy C na úroveň stanovenou laboratorními metodami.

Před testováním je vzorek krve náležitě připraven. Obsažená RNA je adsorbována na nosný pufr, poté promyta a použita k zahájení polymerázové řetězové reakce.

Detekce výsledků se provádí buď elektroforézou (horizontální nebo vertikální), nebo hybridizací. Metoda dekódování výsledků reakce je vybrána na základě cílů studie (jednoduchá identifikace RNA nebo stanovení jejího přibližného množství).

PCR - nejpřesnější krevní test na hepatitidu C.

Seznam navrhovaných studií pro HCV obsahuje několik položek, které se liší cenou, dobou připravenosti a způsobem implementace..

S odvoláním na protokoly Světové zdravotnické organizace (WHO) zahrnuje postup diagnostiky infekce několik po sobě jdoucích fází..

Nejprve si pronajměte:

  • obecná analýza krve a moči;
  • biochemie krve;
  • výzkum obsahu glukózy (přísně na prázdný žaludek);
  • Test na HIV;
  • fluorografie;
  • imunogram (pokud máte podezření na přítomnost autoimunitních patologií).

Pokud se parametry biochemického krevního testu odchylují od fyziologické normy, je pacientovi předepsán test založený na detekci specifických protilátek produkovaných kontaktem viru s krví (ELISA).

Ale takový krevní test na hepatitidu C má významnou nevýhodu. Proces syntézy protilátek závisí na fungování a produkci imunokompetentních buněk. Jednotlivé charakteristiky těla mohou způsobit falešně negativní i falešně pozitivní reakce..

Před předepsáním testu ELISA lékař řekne pacientovi o možné chybě, což vyvolává otázku odpovědi: „Který krevní test ukazuje hepatitidu C s minimálním rizikem nesprávných výsledků?“ K potvrzení nebo vyvrácení diagnózy je nejpřesnějším laboratorním testem PCR v reálném čase.

Další taktika akce závisí na tom, co ukazuje výzkum. Pokud je diagnóza potvrzena, pacientovi jsou okamžitě předepsány hepatoprotektory, upozorněni na důležitost správné výživy a zdravého životního stylu. Cílená terapie je však nemožná bez stanovení úrovně virové zátěže a genotypu hepatitidy C..

Některé léky mohou vyvolat exacerbaci hepatitidy B. Proto, aby se vyloučily komplikace, jsou navíc předepsány testy na HBsAg. HCV je léčen až po negativním výsledku testu.

Druh: kvalitativní, kvantitativní a genotypizační

Při počáteční diagnóze hepatitidy C se titr produkovaných protilátek stanoví sérologickou metodou. Tento výsledek zhruba ukazuje aktivitu patologického procesu. Lékař však může získat nejpřesnější informace až po prostudování údajů PCR.

V současné době se téměř ve všech laboratořích provádí analýza pomocí ultracitlivé metody. Diagnóza HCV je tedy možná do 10–14 dnů po infekci, méně často - po 2,5–3 týdnech. V závislosti na cílech sledovaných během studie lékař předepíše konkrétní typ testu.

Existují následující typy PCR:

  1. Kvalitativní. Při předepisování diagnostických testů mají pacienti otázku, co tato výzkumná metoda ukazuje. Kvalitativní analýza metodou PCR je vysoce citlivý test, který určuje přítomnost virové RNA v krvi při minimální koncentraci. Obvykle se tento druh polymerázové řetězové reakce provádí pomocí technologie reverzní transkripce. Jedná se o jednu z mála metod PCR, ve kterých lze RNA použít jako cíl.
  2. Kvantitativní. Kvantifikace hepatitidy C může určit přesnou hladinu HCV RNA v krvi. Výzkum je možný pouze jedním způsobem - metodou v reálném čase. V průběhu přípravy materiálu pro PCR se do vzorku přidá barvivo. Po každém amplifikačním cyklu se provádí automatizovaná kvantitativní studie v reálném čase. Tato technika se často provádí v kombinaci s reverzní transkripcí. Je tedy možné kvalitativně určit malý počet kopií RNA viru. Má smysl kvantitativně stanovit hladinu HCV RNA, pokud se získá pozitivní výsledek kvalitativní PCR..
  3. Genotypizace. Analýza se provádí v závěrečné fázi diagnostického procesu. Princip studie je založen na rozdílu v nukleotidové sekvenci, která odlišuje jeden genotyp viru hepatitidy C od druhého. Analýza se obvykle provádí pomocí multi-primerové (multiplexní) PCR.

Pokud máte podezření na nosič viru, je nutné provést vysoce kvalitní PCR. Pokud je výsledek negativní, je člověk s největší pravděpodobností zdravý. Aby se však infekce zcela vyloučila, doporučuje se studii opakovat po 7-10 dnech. Pokud je detekována RNA viru, provedou se další testy (kvantitativní a genotypové).

Indikace pro laboratorní test

Hlavní indikací pro darování krve na hepatitidu C metodou polymerázové řetězové reakce je pozitivní enzymová imunotest (bez ohledu na typ: celkový, diferencovaný test na IgG a IgM).

Kromě toho musíte zkontrolovat:

  • během těhotenství (test se provádí dvakrát - v prvním trimestru a 7-10 týdnů před narozením);
  • při práci se zvýšeným rizikem infekce (zdravotní sestry, laboratorní asistenti, zaměstnanci dárcovských center, kosmetologové atd.);
  • s promiskuitním pohlavním stykem a nechráněným kontaktem s neznámou osobou;
  • na pozadí HIV, rakoviny, užívání určitých léků atd.;
  • intravenózně závislí na drogách;
  • s neustálým prováděním invazivních diagnostických nebo terapeutických postupů;
  • s krevní transfuzí provedenou před rokem 1992 (dříve neexistovaly spolehlivé způsoby kontroly přítomnosti biologického materiálu dárce na přítomnost viru).
  • když otevřená rána přijde do styku s krví někoho jiného, ​​nesterilizované lékařské nástroje.

Výskyt každoročně roste. Proto se pro včasné odhalení infekce doporučuje provádět laboratorní testy na HCV jednou ročně..

Kde se nechat otestovat

Při kontaktu s klinikou má pacient nárok na bezplatné testy. Nejprve ale absolvují test ELISA. A pouze s pozitivním nebo pochybným výsledkem je ukázána studie PCR. Naléhavou diagnózu lze proto provést kontaktováním placené laboratoře, kde můžete darovat krev pro PCR v době vhodné pro pacienta. Současně se doporučuje okamžitě zkontrolovat ukazatele jaterních enzymů, standardní klinické krevní parametry.

Studie krve pomocí PCR je zpravidla dostupná téměř v jakékoli laboratoři. Pokud místo odběru krve není vybaveno správným vybavením, je biologický materiál přepravován k výzkumu v souladu s teplotním režimem a dalšími podmínkami. PCR na klinice je možná pouze po dalších vyšetřeních, jejichž výsledky nepřímo naznačují přítomnost hepatitidy C..

Jak správně darovat krev

Před darováním krve k detekci možného viru byste měli dodržovat řadu pravidel pro přípravu analýzy..

Hlavní aspekty jsou uvedeny v poznámce:

  1. Po dobu 5-7 dnů se vzdejte konzumace tučných, smažených potravin, alkoholu. Lékaři obecně doporučují dodržovat výživová pravidla pro dietu číslo 5.
  2. Nejezte 12-14 hodin před studií. Můžete pít jen vodu.
  3. Je lepší darovat krev ráno..
  4. Před zákrokem nekuřte.

Měli byste také upozornit lékaře na užívané léky, možné zdravotní problémy, chronická onemocnění..

Krev se odebírá z žíly. Po ukončení procedury sestra uzavře místo vpichu sterilní náplastí, upozorní na nutnost ohnout paži a držet ji v této poloze po dobu 10-15 minut. Jinak je pravděpodobnost bolestivého hematomu vysoká..

Jak dlouho trvá výzkum?

Kolik analýzy se provádí, záleží na laboratoři. Průměrná doba realizace se pohybuje od 1 do 3 dnů. Některé kliniky poskytují placenou službu pro rychlé testování PCR, čas je však omezen schopnostmi lékařského vybavení..

Na klinice mohou být výsledky předány lékaři do 7-10 dnů. To je spojeno s velkým přílivem pacientů. Současně je biologický materiál skladován v souladu se všemi požadavky.

Dekódování výsledků

Dekódování vysoce kvalitní PCR není zpravidla obtížné. Aby se však předešlo nesprávné interpretaci, měli byste se s formulářem obdrženým od laboratoře poradit s lékařem. Možnosti, které znamenají tento nebo ten typ PCR, jsou uvedeny v tabulce.

Negativní: osoba je zdravá nebo koncentrace virové RNA v krvi je příliš nízká na detekci.

Pozitivní: osoba je infikována

Provádí se, pokud je RNA viru detekována kvalitativní výzkumnou metodou.

V závislosti na získaných výsledcích testu se stanoví úroveň virové zátěže

Provedeno pro hepatitidu C, potvrzeno dalšími výzkumnými metodami.

Analýza umožňuje určit přesný genotyp patogenu patologie

Často však nastává situace, kdy je ELISA pro hepatitidu C pozitivní a PCR negativní. Pouze lékař může dešifrovat takové výsledky testů..

Taková data jsou však možná v následujících případech:

  • těhotenství;
  • přenesena v akutní formě hepatitida C;
  • Léčba HCV dokončena;
  • přítomnost infekcí, které zvyšují pravděpodobnost falešně pozitivního výsledku testu ELISA.

Pouze polymerázová řetězová reakce ukazuje přesnou přítomnost virové infekce v těle. Na pozadí negativní PCR pozitivní ELISA ve většině případů naznačuje, že osoba není infikována. Lékař by však měl určit přesnou příčinu falešně pozitivního výsledku..

Kvalitativní analýza

Kvalitativní analýza PCR pro hepatitidu C potvrzuje přítomnost patogenu v krvi. Pokud není detekována RNA viru, je člověk zdravý. Pokud je však podezření na infekci, doporučuje se studii znovu podstoupit. Pozitivní výsledek naznačuje infekci. Tato analýza však neumožňuje odlišit chronickou hepatitidu C od akutní a nemůže ukázat, jak aktivní je patologický proces..

Kvantitativní test

Kvantitativní analýza pomocí PCR se provádí po potvrzení diagnózy a její dekódování je důležité pro stanovení taktiky léčby. V závislosti na koncentraci částic původce hepatitidy C se rozlišuje několik stupňů virové zátěže: střední, vysoká a nízká. Čím vyšší je indikátor, tím je infekce závažnější a terapie je obtížnější. Virová RNA obvykle v krvi chybí.

Genotypizace

Mnoho laboratoří provádí genotypizaci ve spojení s kvantitativní PCR, což šetří peníze. Taková studie se provádí pouze jednou, před zahájením léčby. Analýza se obvykle provádí pro jeden ze čtyř nejběžnějších genotypů (1, 2, 3 nebo 4). Podtyp HCV je určen současně. Genotypizace poddruhů 5 a 6 hepatitidy C není možná v každé laboratoři.

Pros diagnostiky PCR

Diagnostika metodou PCR je rozšířená kvůli:

  • vysoká přesnost (za předpokladu, že jsou použity testovací systémy nejnovější generace);
  • snadnost odběru biomateriálu;
  • rychlé výsledky (maximálně 5 dní).

Hlavní výhoda však spočívá v širokých diagnostických schopnostech studie. Analýza umožňuje nejen identifikovat virus, ale také přesně určit jeho koncentraci v těle a stanovit genotyp infekce. K posouzení účinnosti antivirové léčby je navíc zapotřebí kvantitativní výzkum. Hlavním cílem léčby je dosáhnout rychlosti testu (tj. Nedetekovatelné hladiny HCV RNA) ve 4, 12 nebo 24 týdnech antivirové léčby a udržet tento výsledek.

Náklady

Cena PCR analýzy se liší podle regionu. Takže v Moskvě jsou ceny vyšší. Vysoce kvalitní PCR bude stát 600-800 rublů, kvantitativní - 2200-3000 rublů, genotypizace - od 1000 rublů. Kolik konkrétní studie stojí, zjistíte přímo v laboratoři, na webových stránkách lékařské organizace nebo telefonicky.

Kvalitativní analýza pro hepatitidu C: dekódování

Příčinou vývoje virové hepatitidy C je infekce patogenem, který patří do rodiny Flaviviridae. Mezi infekcí a začátkem produkce protilátek je detekován dlouhý časový interval, který neumožňuje včasnou diagnostiku onemocnění pomocí enzymového imunotestu.

Při podezření na infekci se provádí PCR analýza na hepatitidu C, biochemii, CBC, jaterní testy. Pomocí polymerázové řetězové reakce je možné detekovat virus v krvi i v prvním týdnu infekce, což je dominantní výhoda metody.

Kvantitativní a kvalitativní analýza pro hepatitidu C a vlastnosti studie, jak se připravit, zda existují chyby, dekódování - budeme podrobně uvažovat.

Co je to metoda polymerázové řetězové reakce?

Polymerázová řetězová reakce je technika molekulárního výzkumu pro stanovení genetického materiálu virové látky od prvních dnů infekce. Analýza je charakterizována vysokou mírou spolehlivosti, specificity a přesnosti. Díky němu je detekována nejen nepřítomnost / přítomnost viru, ale také virová zátěž (kvantitativní hodnota), genotyp.

Pro studii je potřebná krev pacienta, ve které je pravděpodobně lokalizována RNA virové infekce. Za laboratorních podmínek se k biologické tekutině přidávají primery - jedná se o uměle syntetizované fragmenty požadovaného genu krátké délky. Plus RNA polymeráza - specializovaný enzym, který znásobuje koncentraci požadovaného materiálu.

Dále se krev s přídavkem složek několikrát zahřívá a ochladí ve speciálním zařízení. Poté přichází analýza získaných výsledků, srovnání se známými geny virového agens. Na základě toho je učiněn závěr o této nemoci.

Odrůdy výzkumu PCR

Analýza pro hepatitidu C PCR se provádí v laboratoři s přidáním potřebných činidel, má tři odrůdy s charakteristickými vlastnostmi:

  1. Kvalitativní PCR analýza pro hepatitidu C je první fází studie. Prostřednictvím něj je detekován genetický materiál patogenu v krevním séru.
  2. Kvantitativní studie umožňuje odhadnout virovou zátěž - to je obsah virového materiálu v 1 ml pacientovy krve. Provádí se před zahájením léčby a poté po 1-4-12 týdnech léčby. Pokud je kurz dlouhý, musí být studie provedena po 24 týdnech léčby, aby se posoudila účinnost.
  3. Genotypizace. Infekční onemocnění se rychle rozvíjí, virus má tendenci mutovat. Proto je nutné identifikovat genotyp viru.

Vědci identifikovali 7 genotypů viru. V Ruské federaci jsou velmi časté druhy 1-2-3.

Každý z genotypů se vyznačuje odolností vůči léčbě.

Například u typu 1 je účinnost terapie přibližně 60%, na pozadí 2-3 typů dosahuje indikátor 85%.

Chcete-li najít správné léky, délku léčby, je nutné zjistit nejen fakt infekce, ale také koncentraci viru, jeho genotyp.

Indikace pro

Markery pro hepatitidu, PCR a ELISA, jiné testy mají určité lékařské indikace:

  • Pokud má pacient v minulosti infekci HIV, AIDS.
  • Kontakt s infikovanou osobou, protože virová hepatitida je vysoce nakažlivá.
  • Příznaky cirhózy jater - hepatomegalie, zvětšení sleziny, žilní vzor se objevil na břiše atd..
  • Klinika funkční dysfunkce jater - periodická / neustálá bolest v pravém hypochondriu, zežloutnutí kůže, nevolnost.
  • Vysoké hodnoty AST a ALT v biochemii krve.
  • Během těhotenství, kdy jsou jaterní funkční testy špatné.
  • Před zahájením antivirové léčby k určení virové zátěže.
  • Sledovat účinnost terapie.
  • Po terapii, aby se zabránilo opakování virové infekce.

PCR se provádí s potvrzenou diagnózou hepatitidy B, aby se vyloučil smíšený typ poškození jater.

Příprava na výzkum a odběr vzorků materiálu

Jak se připravit na analýzu, řekne lékař. Pro získání přesného výsledku se pacientovi doporučuje příprava. Skládá se z následujících doporučení:

  1. Analýza musí být provedena ráno, na lačný žaludek. Před odběrem krve je povoleno pít pouze čistou nesycenou vodu. Poslední jídlo - 8 hodin před odběrem.
  2. Pokud si nemůžete nechat udělat test ráno, můžete to udělat večer nebo v poledne, co je nejdůležitější - 5-6 hodin po jídle, ne dříve.
  3. 48 hodin před studií se vzdejte alkoholických nápojů, kofeinovaných nápojů, džusů.
  4. Po dobu 2 dnů musíte dodržovat dietu, s výjimkou všech škodlivých produktů. Někteří lékaři se však domnívají, že mastná smažená jídla neovlivňují přesnost testu PCR..

Neužívejte žádné léky 24 hodin před zákrokem. Pokud to není možné, informujte svého lékaře. Analýza se nedoporučuje provádět ihned po ultrazvuku, CT, masáži a dalších fyzioterapeutických procedurách.

Odběr krve probíhá následovně:

  • Pomocí speciálního škrtidla utaženého na předloktí pacienta lékař zastaví tok žilní krve. Žíly se stávají viditelnějšími, což usnadňuje zavedení jehly a následné odběr krve.
  • Oblast kůže před zavedením sterilní jehly je ošetřena kapalinou obsahující alkohol.
  • Do žíly se vloží jehla, na kterou se připojí zkumavka, do které proudí krev.
  • Po zavedení jehly je turniket odstraněn. Odeberte požadované množství krve, odstraňte jehlu.
  • Na místo vpichu se aplikuje vatový tampon namočený v alkoholu.

Aby se zabránilo tvorbě modřin v místě vpichu, je nutné vatový tampon natlačit dostatečně silně na poraněné místo, ohnout paži a držet ji v této poloze po dobu 3-4 minut.

Pokud pacient užívá léky na ředění krve (aspirin, warfarin), mohou nastat určité problémy se zastavením krvácení.

Výhody PCR oproti jiným testům

Metoda polymerázové řetězové reakce má určité výhody oproti jiným diagnostickým technikám..

Výhody studie jsou uvedeny v tabulce:

Typ studieMožný výsledek a zamýšlený přepis
Vysoce kvalitní PCR
Kvantitativní
Genotypizace
Přímá diagnóza původce patologieJiné studie nám umožňují odpovědět - je v těle patogen nebo ne. Ale pomocí technik PCR můžete konkrétně určit typ virového agenta.
Specifičnost studiePCR detekuje jedinečný kousek DNA, který odpovídá pouze jednomu typu virové látky. Tím se minimalizuje pravděpodobnost chyby..
Vysoký stupeň citlivostiJe možné detekovat i nepatrnou koncentraci viru v krvi.
Stanovení všech patogenůBěhem výzkumu mohou být detekovány všechny patogenní látky.
Latentní infekceKromě virového patogenu lze detekovat infekce, které mají latentní průběh, se vyznačují vysokou antigenní aktivitou..

Pokud pacient obdrží pozitivní výsledek, bude to znamenat, že v biologické tekutině byl nalezen genetický materiál původce hepatitidy. Záporný součet - žádné stopy viru.

Dekódování výsledků

Lékař by měl dešifrovat výsledky na základě závěru, který pacient obdrží v laboratoři. Je nutné analyzovat data ve spojení s indikátory biochemie, CBC, ultrazvuku.

Kvalitativní

Kvalitativní studie ukáže přítomnost nebo nepřítomnost původce virového onemocnění v lidské krvi. Mohou existovat dvě možnosti - negativní (norma) nebo pozitivní výsledek.

Formulář někdy říká: nalezeno nebo nenalezeno.

Pozitivní výsledek - laboratorní asistent identifikoval genetický materiál virové látky v krvi pacienta, infekce byla potvrzena. Negativní závěr - nedochází k žádné infekci, fragmenty RNA viru jsou pod limity citlivosti.

Kvantitativní

Kvantitativní analýza zahrnuje několik možností pro výsledky. Pro větší pohodlí je představíme ve formě tabulky..

VýsledekDekódování
ZápornýTo je norma pro zdravého člověka. To znamená, že ve studovaném biologickém materiálu není RNA virové hepatitidy nebo je obsah nižší než prahové hodnoty citlivosti.
Až 1,8 * 10 ^ 2 IU / mlOznačuje, že obsah RNA je menší než kvantifikační rozsah. Tento výsledek musí být interpretován opatrně, protože je považován za kontroverzní. Dále jsou prováděny další studie pro následné srovnání. Opakujte také test PCR.
Až 8 * 10 ^ 5 IU / mlNízká virová zátěž. Tento výsledek zpravidla znamená, že léčba je účinná..
Od 8 * 10 ^ 5 IU / mlVysoká virová zátěž. Okamžitě je nutná léčba (pokud není provedena) nebo je nutná korekce léčby.
2,4 * 10 ^ 7 IU / mlRNA je větší než horní kvantifikační maximum. Na tomto pozadí není hodnocena virová zátěž. Je nutná druhá studie s ředěním vzorku biologické tekutiny.

Genotypizace

Výsledek - byla nalezena ribonukleová kyselina specifického genotypu. Dále je uveden genotyp a podtyp, laboratorní asistent kóduje závěr latinskými písmeny a čísly. Například genotyp 1a. Celkem se rozlišuje 7 genotypů, 67 podtypů.

Výsledek - byla zjištěna RNA viru hepatitidy C - jedná se o DNA vzácného genotypu, který nelze připsat běžným virovým látkám, proto je nutná další diagnostika.

Když je PCR negativní a ELISA je pozitivní

Dešifruje závěr laboratorního asistenta hepatologa nebo specialisty na infekční choroby. Vždy existuje riziko získání falešně negativního nebo falešně pozitivního výsledku. Někdy se stává, že PCR je negativní a ELISA je pozitivní.

To znamená, že v současné době není v krvi pacienta žádný virus, ale utrpěl akutní onemocnění. Obecně se věří, že ELISA ukazuje protilátky, které jsou produkovány imunitním systémem po invazi patogenu do těla..

ELISA se ve srovnání s PCR vyznačuje nízkou spolehlivostí a spolehlivostí, proto se používá jako primární screening. Při diagnostice virové hepatitidy je polymerázová řetězová reakce nezbytná.

Náklady na testování na hepatitidu C.

Můžete podstoupit testy v nemocnici, kde je pacient sledován, pokud tam je laboratoř, nebo kontaktovat soukromé centrum za poplatek.

Za krátkou dobu můžete získat výsledek v laboratorních centrech jako Gemotest, Invitro, Helix.

Náklady na výzkum v závislosti na laboratoři:

Název laboratorní službyCenová politika
Spirála· Náklady na odběr biologického materiálu - 170 rublů.

Kvalitativní + kvantitativní výzkum metodou PCR - 3990 rublů.

Detekce protilátek virového onemocnění - 1500 rublů (2-3 dny).

Kontrola aktivity viru před zahájením léčby - 4090 rublů.

InvitroKvantitativní detekce RNA viru hepatitidy C pomocí PCR - 3140 rublů.

Odběr biologického materiálu (venózní krev) - 199 rublů.

Hodnocení virové zátěže s detekcí v reálném čase - 18 000 rublů.

Vysoce kvalitní ultrazvukový test - od 3000 rublů.

Genotypizace - od 1250 rublů.

HemotestCena kvantitativního výzkumu 2200 rublů.

Vysoce kvalitní diagnostika od 700 rublů.

Stanovení RNA patogenu - od 4000 rublů.

Odběr krve ze žíly asi 150 rublů.

Délka studie je v průměru 2–3 dny. V některých laboratořích existuje služba jako urgentní analýza, její cena je 1,5-2krát vyšší. Je také možné zavolat lékaře k darování krve a obdržet výsledky e-mailem nebo osobně, když kontaktujete laboratoř..

Diagnostika PCR pro hepatitidu: jak dešifrovat, tabulka

PCR analýza pro hepatitidu - co to je a proč se to dělá

Podstatou analýzy PCR je, že část zkoumaného genu je nucena množit se ve zkumavce pomocí speciálních enzymů a podmínek. PCR analýza virů hepatitidy vám umožňuje určit kmen viru, bez kterého není možné provést účinnou léčbu: každý genotyp je odlišně citlivý na antivirové léky.

Používají se dva typy PCR:

  • kvalitativní;
  • kvantitativní.

Antivirová léčba vyžaduje neustálé sledování, aby bylo možné včas upravit léčbu; pro tyto účely se také používá polymerázová řetězová reakce.

Kvalitativní a kvantitativní PCR

Vysoce kvalitní PCR pro hepatitidu dává odpověď: existuje kmen viru v krvi pacienta a který z nich. Genotypizace je nezbytná k objasnění diagnózy, prognózy onemocnění a stanovení načasování léčby.

Po potvrzení přítomnosti viru se provede kvantitativní PCR pro hepatitidu, pomocí které se vypočítá počet molekul RNA v laboratorním vzorku pacienta.

Příprava na PCR analýzu hepatitidy

Pro analýzu metodou polymerázové reakce je nutná žilní krev. To musí být provedeno ráno na lačný žaludek..

Pacient by se měl na studii řádně připravit:

  • Po dobu 10 hodin, abyste odmítli jídlo, můžete pít pouze čistou vodu.
  • Přestaňte pít alkohol den předem, nekuřte 4 hodiny.
  • Před vyšetřením je třeba se vyvarovat fyzického a emočního stresu..
  • Po dobu 2 dnů přestat užívat léky, pokud to není možné, je nutné varovat laboratorního asistenta. Některé léky ovlivňují konečný výsledek.

PCR analýza pro hepatitidu C.

Pokud PCR test na hepatitidu C poskytne pozitivní výsledek, znamená to, že se patogenní mikroorganismus neustále dělí a infikuje jaterní buňky.

Následná kvantitativní PCR pro hepatitidu C se měří v mezinárodních jednotkách na 1 ml nebo IU / ml, což znamená, kolik kopií ribonukleové kyseliny určitého kmene viru C se nachází v 1 ml testované krve.

Níže uvedená tabulka ukazuje dekódování kvantitativní studie pro hepatitidu C metodou PCR:

Virová nálož, počet kopií / mlHodnocení zatíženíPovaha replikace patogenu
103 a méněVelmi nízkýNeaktivní
104 - 105NízkýČastěji neaktivní
106MírnýAktivní
107VelkýVysoce aktivní
  1. Nízká virová zátěž je signálem, že terapeutická léčba je zvolena správně, a prognóza léčby hepatitidy C je příznivá..
  2. Vysoká koncentrace virových buněk naznačuje, že onemocnění je v akutní fázi. Krev pacienta je nebezpečným zdrojem infekce.
  3. Virová zátěž, jejíž ukazatele jsou na průměrné úrovni, charakterizuje buď chronické stádium HVS, nebo může mít dva vývojové trendy: směrem k jejímu zvýšení nebo snížení.

Kvantitativní analýza PCR pro hepatitidu C se provádí po celou dobu antivirové léčby: po 4, 12 a 24 týdnech, jejímž účelem je snížit virovou zátěž.

Na konci - po 6 měsících se provede kontrolní PCR.

PCR analýza pro hepatitidu B.

K detekci infekce (HBV DNA) se provádí PCR analýza na hepatitidu B (B).

Koncentrace HBV DNA se měří v kopiích / ml nebo mě / ml. Při hodnocení výsledků studie se řídí následujícími ukazateli:

  • 2x10 ^ 6 - v devadesáti pěti procentech případů se stane chronickými.

Dekódování analýzy PCR pro hepatitidu

Kvalitativní analýza PCR má dvě odpovědi:

  1. záporný;
  2. pozitivní.

PCR negativní znamená, že ve vzorcích krve nebyl nalezen žádný patogen.

Pravděpodobnost spolehlivosti výsledku je 95%. Zbývajících 5% je lidská chyba. Tato možnost je povolena z důvodu vysokých požadavků na studium:

  • pravidla pro skladování činidel;
  • odpovídající kvalifikace zdravotnického personálu;
  • čistota biomateriálu.

Samotná souprava PCR má 100% diagnostickou přesnost.

Kvantitativní PCR pro hepatitidu vám umožňuje určit virovou zátěž těla pacienta. S jeho pomocí:

  • je specifikováno stádium onemocnění (akutní, chronické);
  • je stanovena účinnost antivirové léčby;
  • je určena potřeba biopsie jater.

V některých případech pacient nepociťuje žádné známky onemocnění, zatímco metoda PCR prokázala infekci. To znamená, že nemoc je v rané fázi vývoje nebo v chronické formě. K objasnění diagnózy je nutný další výzkum pro včasné zahájení antivirové léčby.

Náklady na diagnostiku PCR

Vládní kliniky provádějí krevní testy na PCR zdarma, pokud je k dispozici doporučení od specialisty na infekční onemocnění nebo hepatologa.

Placené služby pro diagnostiku PCR jsou poskytovány ve všech hlavních ruských městech. Cena závisí na typu testu, dostupném vybavení, načasování a dalších faktorech.

  • Vysoce kvalitní analýza PCR v Moskvě a Petrohradu bude stát od 600 do 900 rublů. V regionech - od 300 do 800 rublů.
  • Stanovení virové zátěže hepatitidy C bude stát 17 000–22 000 rublů. U hepatitidy B (B) cena kvantitativní studie: 1200-10000 rublů.

Výhody a nevýhody metody PCR

Jaké jsou výhody metody polymerázové řetězové reakce oproti jiným diagnostickým metodám?

  1. Široká škála aplikací. Pomocí PCR a standardního vybavení můžete identifikovat jakýkoli virus.
  2. Přesnost stanovení patogenu. Použitím různých kombinací enzymů a testovacích technik je dosaženo 100% specifikace testu pro indikovanou infekci.
  3. Vysoká citlivost. Tato technika umožňuje detekovat přítomnost jedné molekuly viru v krvi.
  4. Účinnost. Kvalitativní analýza je hotová za několik hodin, kvantitativní analýza za dva dny.
  5. Diagnostika viru během inkubační doby. Při PCR není patogen určen přítomností protilátek, pokud již existuje imunitní odpověď těla, ale před nástupem patologického procesu, který usnadňuje léčbu.

Nevýhody PCR analýzy jsou důsledkem jejích výhod:

  • pro čistotu analýzy je vyžadován nejvyšší stupeň čistoty, včetně vzduchu v laboratoři, aby se „cizí“ DNA nedostala do studovaného vzorku;
  • vysoké požadavky na pracovníky provádějící odběr vzorků a analýzu biomateriálu.

Posouzení získaných výsledků by měl provádět ošetřující lékař, který ví, jak oddělit skutečnou analýzu od falešně pozitivních (když je léčba již dokončena, ale v krvi zůstává neživotaschopný virus) a falešně negativních (pokud virus není detekován v klinickém obrazu).

PCR analýza pro hepatitidu C.

Pro stanovení diagnózy chronické virové hepatitidy C (CVHC) je nutné komplexní vyšetření osoby, které zahrnuje klinické, laboratorní a instrumentální studie. Z hlediska diagnostiky je pro správnou diagnózu důležitá metoda PCR - polymerázová řetězová reakce..

Co tato analýza ukazuje a proč je potřeba?

Tato laboratorní metoda detekuje RNA viru hepatitidy C v lidské krvi. Spolu s testem ELISA na protilátky proti viru se pomocí PCR diagnostikuje chronická hepatitida C a genotyp jejího původce. Tato studie je jednou z nejnovějších laboratorních diagnostických metod. Jeho spolehlivost v CVHC přesahuje 97%, což je považováno za velmi dobrý ukazatel pro výzkum.

Existují tři PCR testy krve na chronickou hepatitidu C: kvalitativní, kvantitativní a genotypizace viru. První studie (kvalitativní analýza) viru ji detekuje v krvi, proto se používá pouze pro stanovení diagnózy.

Druhá (kvantitativní) studie určuje stupeň virové zátěže těla, proto se používá ke sledování účinnosti léčby.

Třetí PCR (genotypizace) objasňuje diagnózu stanovením genotypu viru, který je velmi důležitý pro stanovení správné antivirové léčby.

Podstatou techniky polymerázové řetězové reakce je použití enzymů, které opakovaně množí genetický materiál patogenu v biomateriálu. V procesu takové replikace se zkumavka s krví několikrát zahřeje a ochladí na teplotu nezbytnou k urychlení enzymatické reakce. V důsledku těchto manipulací se množství virového genomu mnohonásobně zvyšuje, což umožňuje jeho detekci i při minimálním množství.

Diagnostika PCR má oproti jiným laboratorním testům mnoho výhod:

  • vysoká citlivost - 97-98%;
  • zaručená analytická specificita (identifikuje přesně patogen, který chcete najít, a nikoli jeho související kmen);
  • rychlost provedení (získání stanoviska trvá ne více než 2 dny).

Tři typy analýz PCR

Vysoce kvalitní PCR analýza je předepsána všem pacientům, u nichž byly pomocí ELISA analýzy detekovány protilátky proti viru CVHC. Po provedení kvalitativní PCR lze získat dvě varianty odpovědi: „RNA detekována“ nebo „RNA nebyla detekována“. K detekci minimálního množství viru v krvi jsou nutné testovací systémy s citlivostí nejméně 50 IU / ml. Pokud je koncentrace viru v krvi pacienta nižší, než stanoví diagnostické údaje, může být výsledek testu falešně negativní. Aby se zabránilo takovéto diagnostické chybě, musí být laboratoře provádějící diagnostiku PCR vybaveny vysoce citlivými testovacími systémy. Například v laboratoři „Invitro“ se používají testy s citlivostí 15 IU / ml. Pracovníci laboratoře jsou povinni poskytnout pacientům a lékařům informace o citlivosti testů na jejich první žádost..

Kvantitativní analýza PCR určuje stupeň virémie, tj. Koncentraci patogenu v krvi, virovou zátěž. Výsledek této studie, na rozdíl od kvalitativní PCR, je vyjádřen v číslech, například 2 × 10 * 6 IU / ml, což znamená 2 miliony mezinárodních jednotek v 1 ml krve. Některé laboratoře používají jiný indikátor - počet kopií / ml. Tyto dva indikátory lze snadno převést: 1 mezinárodní jednotka se rovná 4 kopiím RNA. 2 × 10 * 6 IU / ml tedy bude znamenat, že 8 × 10 * 6 kopií virové RNA v 1 ml se nachází v pacientově krvi, tj. 8 milionů kopií v 1 ml krve.

Genotypizace je definice jednoho ze šesti genotypů viru. Klinický obraz, rychlost vývoje komplikací z jater a prognóza budoucího života pacienta závisí na genotypu patogenu. Genotyp viru je velmi důležitý již ve stadiu diagnostiky, protože kombinace léků a délka terapeutického průběhu, který bude pacientovi předepsán, závisí na jeho správné definici..

Avšak i taková zdánlivě „ideální“ laboratorní studie má své nevýhody:

  • během studie dojde k replikaci genetického materiálu všech patogenů, dokonce i neživých, což může zkreslit výsledek. K monitorování účinnosti pomocí PCR se proto opakovaná analýza provádí nejdříve 2 měsíce po předchozí, aby mrtvé viry měly čas „opustit“ tělo pacienta;
  • část virového genomu, která se stanoví pomocí testovacích systémů, může být teoreticky přítomna v jiných virech nebo mikroorganismech, a proto existuje možnost falešně pozitivní reakce;
  • viry rychle mutují. Někdy je rychlost a stupeň mutace viru tak vysoká, že testovací systém přestane zachycovat jejich genom. V důsledku toho je možný falešně negativní výsledek..

Aby se zmírnily tyto nedostatky, výrobci laboratorních testovacích systémů pro diagnostiku PCR je neustále testují, včetně zkřížených reakcí a citlivosti na určitý genotyp viru..

Jak provést test PCR na hepatitidu C.?

Aby byl závěr vyšetření metodou PCR spolehlivý, je nutné přísně dodržovat pravidla přípravy na jeho provedení:

  • studie se provádí na prázdný žaludek (glukóza, tuky, minerály, které vstupují do krve z potravy, mohou ovlivnit rychlost a kvalitu enzymové reakce);
  • mezera mezi posledním jídlem a odběrem krve pro analýzu musí být nejméně 8 hodin;
  • v předvečer studie je zakázáno brát alkohol a jíst tučná jídla, jejichž eliminační doba se prodlužuje;
  • den před odchodem do laboratoře je třeba se vyvarovat silného fyzického a emočního stresu;
  • kouření se nedoporučuje do odběru krve.

Aby se zabránilo vzniku falešných závěrů, musí údajný pacient přijít do laboratoře o něco dříve, než je odebrán vzorek krve. Trvá 15-20 minut, než člověk popadne dech a uklidní se. Adrenalin v krvi po rychlé chůzi může ovlivnit výsledek testu.

Pokud pacient odeslaný k analýze užije nějaké léky, musí o tom informovat lékaře. Je možné, že budete muset na chvíli odmítnout některé z nich vzít (pokud je to možné).

Výsledek analýzy PCR pro hepatitidu C.

Dešifrování výsledků provádí laboratorní asistent laboratoře, která provedla analýzu. Dekódování je definice odchylky výsledku od normy. Norma indikátorů je stanovena přímo výrobcem testovacího systému, který laboratoř používá pro diagnostiku. Proto by nemělo být překvapením, že v některých laboratořích je virová nálož stanovena v IU / ml a v jiných - v kopiích / ml..

Po obdržení závěru musíte být schopni správně jej interpretovat. Interpretací výsledků studie by se měl zabývat ošetřující lékař pacienta s hepatitidou C. Pouze po objektivním, instrumentálním a laboratorním vyšetření pacienta může lékař získat dostatečné množství údajů pro kompetentní interpretaci získaných výsledků PCR.

Hodnocení kvalitativní analýzy je obecně přímé, dokonce i pro pacienty. Výsledek může být pouze jeden: „found“ nebo „not found“. Druhý z nich je navíc normou.

Kvantitativní analýza je obtížnější interpretovat. Ukazuje stupeň virové zátěže pacienta. Ani mezi hepatology neexistuje shoda v tom, jak interpretovat detekovanou viremii. Většina lékařů se přiklání k názoru, že zátěž vyšší než 8 × 10 * 5 IU / ml by měla být považována za vysokou. Za velmi vysoké zatížení se považuje více než 1 × 10 * 7 IU / ml a nízké zatížení je menší než 4 × 10 * 5 IU / ml..

Stupeň virové zátěže naznačuje virulenci (agresivitu) viru: čím více je jeho množství v krvi, tím rychleji se mohou vyvinout komplikace z jater. Vysoká koncentrace viru v krvi těhotné ženy zvyšuje pravděpodobnost jeho průniku přes placentární bariéru k plodu. Viremie také ovlivňuje účinnost léčby: s nízkým počtem je účinnost terapie vyšší než s vysokou.

Aby byla zajištěna spolehlivost PCR analýzy pro hepatitidu C, měly by být upřednostňovány pouze ty laboratoře, které se osvědčily. Cenová politika by zároveň neměla hrát primární roli..